DNA甲基化检测 你所在位置 >> 首页 >> 技术服务

        DNA甲基化是一种表观遗传修饰,它是由DNA甲基转移酶(DNA methyl-transferase, Dnmt)催化S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供体,将胞嘧啶转变为5-甲基胞嘧啶(mC)的一种反应,在真核生物DNA中,5-甲基胞嘧啶是唯一存在的化学性修饰碱基。CG二核苷酸是最主要的甲基化位点,它在基因组中呈不均匀分布,存在高甲基化、低甲基化和非甲基化的区域,在哺乳动物中mC约占C总量的27%。一般说来,DNA的甲基化会抑制基因的表达。DNA的甲基化对维持染色体的结构、X染色体的失活、基因印记和肿瘤的发生发展都起重要的作用。

 

一. DNA CpG甲基化检测—MSP法(客户不提供引物)

MSP法原理:用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶(C)被转化为尿嘧啶(U)而甲基化的胞嘧啶则不变。设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR,通过电泳图检测甲基化状态。

周期1-2

 

服务内容
  1. 基因组DNABisulfite转化。
  2. DNA甲基化检测——基于MSPMethylation Specific PCR)法。

样品要求
  ·若提供基因组DNA,需≥2ug
  ·若提供的材料为新鲜组织、血液、细胞等生物材料,请提供足够提取2ug以上基因DNA的材料量。
  ·基于所选择的DNA甲基化检测方法,请提供相应的引物或引物序列。


终产品
  ·Bisulfite处理的基因组DNA
  ·实验报告(包括MSP产物的电泳图片)

服务说明
  ·在基于Bisulfite 转化的DNA甲基化检测的方法中,引物是决定实验成败的关键因素,且视期望检测的目的基因片段的不同,适宜引物的存在与否有较大的不确定性,请尽量采用其可行性经过验证的引物,如因引物等非本公司原因导致某实验步骤失败,使服务提前终止,已启动的实验项目正常收费。若需DNA甲基化检测用引物设计服务,价格另议。

 

 

二. DNA CpG甲基化检测—BSP

BSP法原理:用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶(C)被转化为尿嘧啶(U)而甲基化的胞嘧啶则不变。基因组DNA经亚硫酸盐处理后,设计BSP引物扩增目的片段,此时尿嘧啶(U)全部转化为胸腺嘧啶(T),最后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生甲基化。

周期 1-2

 

服务内容
  1. 基因组DNABisulfite转化。
  2. BSPBisulfite Sequencing PCR)法,PCR产物直接测序,包括引物设计,不包括合成。

样品要求
  ·若提供基因组DNA,需≥2ug
  ·若提供的材料为新鲜组织、血液、细胞等生物材料,请提供足够提取2ug以上基因DNA的材料量。
  ·基于所选择的DNA甲基化检测方法,请提供相应的引物或引物序列。


终产品
  ·Bisulfite处理的基因组DNA
  ·实验报告(包括BSP产物的直接测序报告)

服务说明
  ·在基于Bisulfite 转化的DNA甲基化检测的方法中,引物是决定实验成败的关键因素,且视期望检测的目的基因片段的不同,适宜引物的存在与否有较大的不确定性,请尽量采用其可行性经过验证的引物,如因引物等非本公司原因导致某实验步骤失败,使服务提前终止,已启动的实验项目正常收费。若需DNA甲基化检测用引物设计服务,价格另议。
  ·视BSP产物序列的不同,采用直接检测有可能导致实验结果的可靠性降低;视BSP引物特异性的不同,BSP产物的克隆测序存在插入片段与目的片段不符合的可能性,建议选择同时对多个克隆(>15个)进行测序,以获得足够的数据用于后期分析,最后提供客户5个有效克隆测序结果。

 

 

三. DNA CpG甲基化检测—HRM
  HRM法原理:用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶(C)被转化为尿嘧啶(U)而甲基化的胞嘧啶则不变。在非CpG岛位置设计一对针对经亚硫酸氢钠处理后DNA 链的引物,这对引物中间包含有意义的甲基化CpG岛,一旦这些CpG岛发生甲基化,胞嘧啶(C)不发生变化,而未甲基化的胞嘧啶(C)转变成胸腺嘧啶(T),样品中的 GC 含量发生了变化,最终被转化成了熔解曲线 Tm 值之间的差异

周期 5-6

 

服务内容
  1. 基因组DNABisulfite转化。
  2. HRM(High Resolution Melting)(Real-Time PCR)

样品要求
  ·若提供基因组DNA,需≥2ug
  ·若提供的材料为新鲜组织、血液、细胞等生物材料,请提供足够提取2ug以上基因DNA的材料量。
  ·基于所选择的DNA甲基化检测方法,请提供相应的引物或引物序列。


终产品
  ·Bisulfite处理的基因组DNA
  ·实验报告(包括扩增曲线、HRM曲线)

服务说明
  ·在基于Bisulfite 转化的DNA甲基化检测的方法中,引物是决定实验成败的关键因素,且视期望检测的目的基因片段的不同,适宜引物的存在与否有较大的不确定性,请尽量采用其可行性经过验证的引物,如因引物等非本公司原因导致某实验步骤失败,使服务提前终止,已启动的实验项目正常收费。若需DNA甲基化检测用引物设计服务,价格另议。